关节康治疗膝骨性关节炎的实验与临床研究

　　关节康治疗膝骨性关节炎的实验与临床研究

　　广州中医药大学博士学位论文关节康治疗膝骨性关节炎的实验与临床研究姓名：****学位级别：博士专业：中医骨伤科学指导教师：**光20060501提要目的本课题旨在中医理论指导下，结合现代科学的研究方法，通过对膝骨性关节炎（ＫＯＡ）的实验及临床研究，观察复方中药关节康对膝骨性关节炎的治疗效果，探讨其作用机制，为其进一步临床推广运用奠定基础。方法实验研究：选用新西兰兔，随机分组为正常对照组（Ａ组），模型Ｂｌ组、模型Ｂ２组、关节康治疗组（Ｃ组）、西药对照组（Ｄ组）和中药对照组（Ｅ组）。通过左膝关节腔内注入木瓜蛋白酶，造成骨性关节炎病变模型。木瓜蛋白酶注射结束后２周，处死Ｂ２组全部新西兰兔，取造模侧膝关节，观察造模２周后的关节软骨状况。与此同时，开始对ｃ、Ｄ、Ｅ组分别予以药物关节康、西乐葆（赛来昔布）、壮骨关节丸液体灌胃，４周后处死全部新西兰兔，取Ａ组双侧膝关节及ｃ、Ｄ、Ｅ组造模侧膝关节制作病理标本，分别行ＨＥ染色、ｆｉＢ—ＰＡＳ染色及免疫组化（ＴＧＦ一１３ｌ、ＩＬ—ｌ１３）染色，观察关节软骨及其中蛋白多糖、白介素ｌ（１Ｌ—ｌ１３）关节炎临床试验、转移生长因子（ＴＧＦ—Ｂ１）的染色改变。临床研究：病例选择标准应符合美国风湿病协会膝骨关节炎（１９９５）的诊断标准及膝关节骨关节炎ＩＩ期临床试验方案中属肝肾不足、瘀血阻络证者，患者近１周内未服用其他相关治疗药物或采用相关治疗方法。排除其中按Ｋｅｌｌｇｒｅｎ的Ｘ线分级属级者及因其他疾病可能产生安全性问题或影响疗效评价者。入选病例随机分为关节康治疗组和西乐葆对照组，分别予以关节康片和西乐葆胶囊口服，连续治疗６周。参照改良的膝关节骨性关节炎病情评分标准及疗效判定标准，从症状体征（膝部疼痛、膝部功能）及中医证候（腰膝酸软、头昏耳鸣；膝部刺痛，夜寐不安；舌象、脉象）两方面进行疗效观察。疗程结束后作治疗前后的组内对比及组问对比，比较各组疗效。结果实验研究：１．大体观察结果：Ａ组关节软骨呈正常表现，Ｂ～Ｅ组有不同程度的软骨退变。２．病理评分结果：造模Ｂ２组病理评分均较正常组明显升高（Ｐ＜０．０１），造模Ｂ１组病理评分较造模Ｂ２组进一步上升（Ｐ＜０．０１），各治疗组的病理评分均较造模Ｂ２组升高（Ｐ＜０．０１），但较造模Ｂ１组有不同程度降低，其中关节康组评分最低，与西乐葆组、壮骨关节丸组、造模Ｂ１组之间存在显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５）；壮骨关节丸组、西乐葆组与造模Ｂ１组之间差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；西乐葆组与壮骨关节丸组之间差异无显著性（Ｐ＝０．６３９＞０．０５）。以上提示，各治疗组均能提高软骨基质的蛋白多糖含量，其中以关节康组效果最佳，壮骨关节丸组、西乐葆相对较弱，且后两者无明显差异。３．免疫组化结果：免疫组化染色均定位表达于软骨细胞的胞浆内，正常组ＴＧＦ一１３１、ＩＬ～１Ｂ均阴性或弱阳性表达，模型Ｂ２组ＴＧＦ－Ｂ１、ＩＬ一１Ｂ均为弱阳性，免疫组化染色在软骨各层均有表达，尤其在表层、辐射层、软骨缺损处明显。ＴＧＦ—Ｂ１染色以Ｃ组阳性最强，Ｂ１组最弱。ＩＬ一１１３染色阳性Ｄ组最弱，Ｂ１组最强。ＴＧＦ的Ｐｕ值显示：Ｂ２组Ｐｕ值较正常组高（Ｐ＜０．０１），Ｂ１组的Ｐｕ值较Ｂ２组高（Ｐ＜Ｏ．０１），各治疗组的ＰＵ值均较Ｂｌ组进一步上升（Ｐ＜Ｏ．０１），差异均有显著性，其中关节康组、壮骨关节丸组、西乐葆组、Ｂ１组之间两两比较均存在显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），以关节康组Ｐｕ值最高。以上提示，各治疗组均能升高关节软骨ＴＧＦ的表达，以关节康组效果最明显，壮骨关节丸组次之，西乐葆相对较弱：ＩＬ的Ｐｕ值显示：Ｂ２组的Ｐｕ值均较正常组高（Ｐ＜Ｏ．０１），Ｂ１组的Ｐｕ值较造模Ｂ２组高（Ｐ＜Ｏ．０１），各治疗组的Ｐｕ值均较Ｂ１组低，但均较造模Ｂ２组高（Ｐ＜Ｏ．０１）。其中，西乐葆组的Ｐｕ值最低，其相比关节康组、壮骨关节丸组及Ｂ１组均存在显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０１）；关节康组与壮骨关节丸组、Ｂ１组相比存在显著性差异（Ｐ＜０．叭）；壮骨关节丸组与造模Ｂ１组之间无显著性差异（Ｐ＝０．２４４＞０．０５）。以上提示，在降低关节软骨的ＩＬ一１表达上西乐葆组效果最为明显，关节康次之，壮骨关节丸则无明显意义。掐床研究：１．积分比较：两组患者治疗后的所有各项积分均较自身治疗前改善，差异具有显著性（Ｐ＜０．０１），提示关节康组与西乐葆组均能不同程度改善ｏＡ患者各项病情。２．积分变化比较：治疗后两组患者的组间总积分变化比较Ｐ＝Ｏ．９５２＞０．０５，功能积分变化比较Ｐ＝－Ｏ．０２２＜Ｏ．０５，无显著性差异；疼痛积分变化比较Ｐ＜０．ｏｌ，中医证候积分变化比较Ｐ＜Ｏ．０１，均有显著性差异。提示关节康组与西乐葆组在改善ｏＡ症状体征的总体方面效果相当，西乐葆改善疼痛的效果较好，关节康改善功能及中医证候的效果较好。３．疾病疗效比较：两组疾病疗效比较Ｐ＞０．０５，无显著性差异，提示关节康在ｏＡ病情疗效上和西乐葆效果相当。４．中医证候疗效比较：两组证候疗效比较Ｐ＜Ｏ．０１，有显著性差异，提示关节康在ｏＡ中医证候疗效上优于西乐葆。统计方法：计数资料采用ｘ２检验，计量资料采用ｔ检验。结论ｌ、关节康可增进软骨基质的合成，抑制软骨基质的分解，促进受损关节软骨的修复。２、关节康的疗效机理之一可能在于通过对机体的细胞因子调节，提高关节软骨的ＴＧＦ一０１含量，降低ＩＬ一１０含量，从而直接或间接促进了损伤关节软骨的修复。３、关节康在膝关节骨性关节炎的病情疗效上与西乐葆效果相当，但在改善患者全身状况上具有一定优势，值得迸一步开发研究和推广应用。４．补肾活血可作为中医药治疗骨性关节炎的主要法则关节炎临床试验。关键词膝关节骨性关节炎；关节康；实验研究；蛋白多糖；ＩＬ一１ｐ；ＴＧＦ一１３１临床研究．１ＩＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｒｅａｔｉｎｇｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＧｕａｎＪｉｅｋａｎｇＡｂｓｔｒａｃｔＳｐｅｃｉａＩｉｔｙ：ＯｒｔｈｏｐａｅｄｉＣＳＯｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉＣｉｎｅＡｕｔｈｏｒ：ＺｈｏｕＢｉｎＴｕｔｏｒ：ＦａｎＹｕｅＧｕａｎｇＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＵｎｄｅｒｔｈｅｇｕｉｄａｎｃｅｏｆｔｈｅｔｈｅｏｒｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｕｎｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｍｅｔｈｏｄｏｆｍｏｄｅｒｎｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｉｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＧｕａｎｊｉｅｋａｎｇ（ａｃｏｍｐｌｅｘｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎｅｓｅｎａｔｉｖｅｍｅｄｉＣｉｎｅ）ｔｏｔｒｅａｔｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉＳａｎｄｐｒｏｂｅｉｎｔｏｔｈｅｃｕｒａｔｉｖｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｖｉａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ］ａｎｄＣ１ｉｎｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈ．ｉｔｌａｉｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｕｒｔｈｅｒｅｌｉｎｉｃａｌｐｒｏｍｏｔｉｏｎｔｒｅａｔｋｎｅｅｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉＳＧｕａｎＪｉｅｋａｎｇＭｅｔｈｏｄｓ：Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｅａｒｃｈ：ＴｈｅＮｅｗｓＺｅａｌａｎｄｒａｂｂｉｔＳａｓｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ 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